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腺相關病毒（Adeno-associated virus, AAV）是一種無被膜、具有20面體結(jié)構(gòu)的病毒，含有4.7kb的線狀單鏈DNA基因組。AAV具備宿主范圍廣、安全性高、免疫原性低、長期穩(wěn)定表達等優(yōu)點，是一種理想的基因治療工具，廣泛應用于各種領域的基礎研究與臨床試驗中。
采用三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的Helper-free系統(tǒng)在293T細胞中進行AAV的生產(chǎn)與包裝，并建立了完善的純化與質(zhì)控方法，生產(chǎn)的AAV顆粒可直接應用于各類體內(nèi)體外實驗。
腺相關病毒優(yōu)勢：
1. 宿主范圍廣：可感染分裂細胞與非分裂細胞；多種亞型具有多種組織親嗜性，可以應用于神經(jīng)系統(tǒng)、心肌、肝臟、眼睛、肌肉等定位注射。
2. 擴散性佳：體積小、滴度高，具有遠優(yōu)于腺病毒與慢病毒的擴散性，可穿越血腦屏障，是優(yōu)秀的神經(jīng)元與膠質(zhì)細胞感染工具。
3. 安全系數(shù)高：迄今未發(fā)現(xiàn)野生型AAV對人體致??；ITR與rep/cap基因分別由獨立的質(zhì)粒傳導表達，進一步去除感染風險。
4. 免疫原性低：僅4.7kb的基因組便于重組DNA技術(shù)操作，在動物實驗中局部大劑量使用極少造成非特異性反應與免疫抑制。
5. 長時穩(wěn)定表達：AAV感染可介導外源基因發(fā)生低頻（<2%）定向整合，絕大多數(shù)重組AAV感染細胞后不會整合入基因組，而是在宿主細胞內(nèi)形成伴隨體，因此AAV能夠介導外源基因長期、穩(wěn)定的復制轉(zhuǎn)錄。
6. 穩(wěn)定性好：AAV在60℃不會被滅活，能抵抗多種有機溶劑的處理（例如氯仿）
不同的AAV亞型具有不同的組織嗜親性，我們推薦根據(jù)實驗靶向的器官/細胞，選擇具有相應親和性的AAV亞型進行構(gòu)建，能夠有效提高感染效率。
應用前景：
1、基因治療：AAV作為基因治療中的載體，能夠攜帶健康基因進入患者的細胞，以修復或替代有缺陷的基因。
2、疫苗開發(fā)：AAV還用于疫苗的開發(fā)中。例如，AAV載體能夠?qū)⒖乖騻鬟f到宿主細胞中，從而刺激免疫反應，用于預防某些疾病。
3、神經(jīng)科學研究： AAV能夠高效傳遞基因到神經(jīng)細胞，可用于基因編輯技術(shù)如CRISPR，以特異性地改變神經(jīng)系統(tǒng)中的基因表達。
4、癌癥治療：AAV也被用于將抗癌基因傳遞到癌細胞中，以促進免疫系統(tǒng)識別和消滅癌細胞。
服務/實驗流程：
1. 方案溝通
2. 基因克?。簩⒛康幕騝DNA（Gene of Interest）構(gòu)建入我們的專有AAV轉(zhuǎn)移質(zhì)粒，測序驗證
3. 病毒包裝：三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染（轉(zhuǎn)移質(zhì)粒+病毒包裝質(zhì)粒+輔助質(zhì)粒）入293T細胞
4. 收毒：72h孵育后分別收獲培養(yǎng)上清與細胞沉淀中的病毒
5. 純化濃縮：碘克沙醇梯度離心，高效的分離空衣殼病毒與細胞雜質(zhì)，將具備感染力的病毒富集到90%以上；超濾濃縮
6. 質(zhì)量控制：
- 多重酶切質(zhì)粒鑒定
- qPCR檢測病毒滴度
- SDS-PAGE/考馬斯亮藍測定純度
- 細胞轉(zhuǎn)導檢測（帶有熒光標簽）
- HPLC/內(nèi)毒素檢測/微生物檢測（高純度AAV可選）
交付內(nèi)容：
定制AAV病毒顆粒
對照病毒（可用于轉(zhuǎn)導測試）
詳細實驗報告