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原位瘤實(shí)驗(yàn)(orthotopic tumor)，即原位移植 (orthotopic transplantion) 模型實(shí)驗(yàn)，是將腫瘤組織/細(xì)胞接種到腫瘤原發(fā)組織器官內(nèi)，使之產(chǎn)生腫瘤并形成自發(fā)性轉(zhuǎn)移灶，能夠更好地模擬腫瘤的生長(zhǎng)、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移的全過(guò)程。與皮下荷瘤模型相比，原位移植模型可模擬出同原發(fā)腫瘤發(fā)病部位相似的腫瘤微環(huán)境，能夠更好地預(yù)測(cè)藥物效果，具有一定的臨床學(xué)意義。
1. 實(shí)驗(yàn)原理
腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞、組織特異性免疫細(xì)胞的相互作用會(huì)影響腫瘤的生長(zhǎng)、分化和藥物敏感性。采用開(kāi)放手術(shù)打開(kāi)暴露原發(fā)腫瘤對(duì)應(yīng)的動(dòng)物組織器官，將腫瘤組織或細(xì)胞種植到器官中。通過(guò)可視化體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)方法，如IVIS 生物成像儀等，可形成原位成像，以深入了解腫瘤的生長(zhǎng)、分布和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特征。
2. 實(shí)驗(yàn)步驟
2.1腫瘤細(xì)胞的復(fù)蘇傳代和擴(kuò)增培養(yǎng)
取凍存于液氮的腫瘤細(xì)胞復(fù)蘇并擴(kuò)增，培養(yǎng)，確保腫瘤細(xì)胞的活力和良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。
2.2計(jì)算細(xì)胞接種量
參考相關(guān)文獻(xiàn)并根據(jù)所需要實(shí)驗(yàn)的小鼠總只數(shù)提前計(jì)算確定細(xì)胞數(shù)量。
2.3小鼠的選擇和分組
一般選擇7-8W同一性別健康小鼠，大多選擇免疫缺陷型的裸鼠。如選擇組織塊接種法時(shí)，需準(zhǔn)備皮下荷瘤的小鼠。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行分組。
2.4原位移植模型的構(gòu)建
2.4.1細(xì)胞接種法
將小鼠麻醉后，采用外科手術(shù)法暴露腫瘤原發(fā)組織器官，將稀釋好的腫瘤細(xì)胞直接接種到器官的漿膜下，恢復(fù)臟器解剖位置，縫合漿膜。
2.4.2組織塊接種法
先將腫瘤細(xì)胞皮下接種，制作皮下荷瘤模型，待皮下腫瘤長(zhǎng)至1 cm左右時(shí)，選擇生長(zhǎng)良好、瘤結(jié)無(wú)破潰的荷瘤鼠，在凈化工作臺(tái)內(nèi)，無(wú)菌操作下完整剝離瘤結(jié)，生理鹽水洗去血漬。 剪開(kāi)瘤結(jié)，清除中心的壞死組織，剪成直徑約1 mm大小的米粒樣小瘤塊。將小鼠麻醉后固定四肢，采用外科手術(shù)法暴露腫瘤原發(fā)組織器官，將準(zhǔn)備好的1 mm左右的瘤組織移植到器官的漿膜下，恢復(fù)臟器解剖位置，縫合漿膜。
2.5腫瘤生長(zhǎng)情況和小鼠存活情況的觀察
將小鼠放回原飼養(yǎng)籠，繼續(xù)飼養(yǎng)。術(shù)后每天觀察動(dòng)物有無(wú)并發(fā)癥及異常情況（活動(dòng)，神經(jīng)功能，呼吸，動(dòng)物外觀）。以裸鼠出現(xiàn)惡液質(zhì)、處于瀕死狀態(tài)作為觀察終點(diǎn)，頸椎脫臼法處死。解剖后觀測(cè)荷瘤部位腫瘤的生長(zhǎng)情況。 或采用IVIS 生物成像儀等監(jiān)測(cè)腫瘤的生長(zhǎng)變化。
3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果示例
將乳腺癌細(xì)胞（4T1-luc2）培養(yǎng)后，原位注射到Balb/c小鼠乳腺內(nèi)，7天后每天用游標(biāo)卡尺測(cè)量瘤體體積，并用生物發(fā)光成像系統(tǒng)觀測(cè)瘤體大小和轉(zhuǎn)移情況。
4. 參考文獻(xiàn)
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