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細(xì)胞活力是一個(gè)群體中健康活細(xì)胞比例的指標(biāo)，反映的是細(xì)胞健康的總體情況。細(xì)胞活力的測(cè)定旨在評(píng)估細(xì)胞的物理和代謝狀態(tài)，以確定治療或培養(yǎng)條件對(duì)細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的影響；通常采用CCK-8、MTT等方法進(jìn)行檢測(cè)。
1．實(shí)驗(yàn)原理
CCK-8是一種基于WST-8[2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽]而廣泛應(yīng)用于測(cè)定細(xì)胞增殖或細(xì)胞毒性的一種高靈敏度、無放射性的比色檢測(cè)方法。其原理是WST-8在電子載體作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazan dye），生成的甲瓚產(chǎn)物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比；細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。
2．實(shí)驗(yàn)原理圖
2．實(shí)驗(yàn)步驟
2.1 細(xì)胞鋪板處理
2.1.1 先將14個(gè)多孔材料置于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中浸泡 60 min；
2.1.2 0.25%胰酶37 ℃消化，細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為5x104個(gè)/μL；
2.1.3 浸泡完成后置于24孔超低貼附培養(yǎng)板中，每個(gè)支架滴加100 μL細(xì)胞懸液，靜置 30 min；
2.1.4 再用移液器將培養(yǎng)孔內(nèi)殘余的培養(yǎng)液吸出并再次滴加在多孔支架上，重復(fù) 4次，使細(xì)胞可以充分均勻的粘附在多孔支架內(nèi)；
2.1.5 接種完成之后將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)2 h，等待細(xì)胞初步粘附；
2.1.6 每孔再次添加基礎(chǔ)培養(yǎng)基沒過材料置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2.2 CCK8檢測(cè)細(xì)胞活力
2.2.1 細(xì)胞接種1 d，4 d，7 d時(shí)向24孔板中每個(gè)孔中加入CCK-8溶液；
2.2.2 將培養(yǎng)板置37 ℃培養(yǎng)箱孵育1 h；
2.2.3 完成后，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至96孔板中；
2.2.4 酶標(biāo)儀設(shè)定450 nm后檢測(cè)吸光度，記錄數(shù)據(jù)。
3．實(shí)驗(yàn)結(jié)果示例
不同血清濃度培養(yǎng)條件下OD450檢測(cè)結(jié)果
組別 | 細(xì)胞懸液體積/μL | 血清濃度/% | OD450 |
A | 200 | 10 | 1.91±0.39 |
B | 100 | 10 | 1.75±0.06 |
C | 100 | 5 | 1.51±0.10 |
D | 50 | 5 | 1.23±0.19 |
參考文獻(xiàn)
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