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腫瘤轉(zhuǎn)移是指癌細(xì)胞從原發(fā)灶脫落侵入周?chē)M織，最終克服遠(yuǎn)隔組織微環(huán)境，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象。 轉(zhuǎn)移瘤（metastatic tumor）實(shí)驗(yàn)是利用腫瘤轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型對(duì)體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程進(jìn)行研究的方法，其可以更好地揭示腫瘤轉(zhuǎn)移的過(guò)程、基因的生物學(xué)功能及信號(hào)通路的作用。
1. 實(shí)驗(yàn)原理
腫瘤細(xì)胞具備一定的侵襲轉(zhuǎn)移的能力，把腫瘤細(xì)胞注射入動(dòng)物的血液系統(tǒng)內(nèi)，能夠較好地模擬腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)灶進(jìn)入到血液循環(huán)中的情況，通過(guò)觀察遠(yuǎn)處器官（肺、肝等）內(nèi)轉(zhuǎn)移灶的形成情況，能夠判斷腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。常用的接種方法是尾靜脈注射和左心室注射法。
2. 實(shí)驗(yàn)步驟
2.1制備細(xì)胞懸液
預(yù)先將細(xì)胞接種到培養(yǎng)皿并于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到80 %-90 %，經(jīng)胰酶消化制備細(xì)胞懸液。對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并調(diào)整細(xì)胞密度。
2.3小鼠的選擇和分組
一般選擇4-6W同一性別健康小鼠，大多選擇免疫缺陷型小鼠。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組。
2.4腫瘤轉(zhuǎn)移模型的構(gòu)建
2.4.1尾靜脈注射法
在超凈臺(tái)上，將小鼠固定在固鼠器內(nèi)，壓住鼠尾巴根部，用酒精棉球擦拭尾巴消毒并擴(kuò)展血管，用1 mL注射器吸取細(xì)胞懸液，于尾部中處三分之一處進(jìn)針，注意控制速度防止小鼠發(fā)生栓塞。每只0.1 mL，即1×106個(gè)。不同細(xì)胞接種量可能不同，需要預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行摸索。
2.4.2左心室注射法
小鼠經(jīng)麻醉、仰臥式固定、酒精棉球消毒后，輕按胸部，在胸骨左側(cè)第二，三肋間進(jìn)針（靠近胸骨），注射器內(nèi)留有氣泡時(shí)，針頭進(jìn)入左心室；進(jìn)針3-5 mm，以觀察到鮮紅血液噴射涌出進(jìn)入針管，回血液面隨著裸鼠心率搏動(dòng)上下起伏，作為進(jìn)入左心室的標(biāo)準(zhǔn)；注射，在10 s 內(nèi)完成；注射完畢后緩慢拔針，棉簽按壓進(jìn)針點(diǎn)；裸鼠放置保溫臺(tái)待蘇醒；接種后的裸鼠置于SPF環(huán)境內(nèi)飼養(yǎng)，并密切觀察。
2.5腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移情況和小鼠存活情況的觀察
腫瘤移植后注意觀察各組小鼠全身狀況和活動(dòng)情況，當(dāng)小鼠出現(xiàn)明顯消瘦、弓背、精神萎靡等衰竭體征時(shí)，將小鼠頸椎脫臼處死。定期處死解剖小鼠，觀察肺、肝、淋巴結(jié)等臟器有無(wú)轉(zhuǎn)移灶，統(tǒng)計(jì)各部位轉(zhuǎn)移灶數(shù)目及大小。也可通過(guò)活體成像方法定期觀察腫瘤的轉(zhuǎn)移情況。
3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果示例
將熒光素酶標(biāo)記的MDA-MB-231細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注射到小鼠體內(nèi)，分別于1 h 和24天采用活體成像系統(tǒng)觀察腫瘤肺轉(zhuǎn)移情況。28天解剖可見(jiàn)MDA-MB-231細(xì)胞在肺部形成轉(zhuǎn)移灶。
4. 參考文獻(xiàn)
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