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皮下荷瘤（subcutaneous tumor）實(shí)驗是將腫瘤移植到同種或異種動物的皮下形成腫瘤塊，利用對動物體內(nèi)腫瘤的生長情況的觀測，評估腫瘤細(xì)胞/組織在動物體內(nèi)的增殖能力，一般用于抑制腫瘤生長（細(xì)胞增殖）的藥物的篩選檢測，目前已成為檢測致瘤潛力，評估體內(nèi)新型抗癌藥物的通用方法。
1. 實(shí)驗原理
皮下荷瘤實(shí)驗是將腫瘤細(xì)胞接種到動物側(cè)腹部或背部皮下，利用腫瘤細(xì)胞吸收體內(nèi)營養(yǎng)進(jìn)行細(xì)胞增殖后，形成肉眼可見且可測量的腫瘤組織，通過觀察和監(jiān)測腫瘤組織的形成情況，評估腫瘤細(xì)胞在動物體內(nèi)的增殖能力及抗腫瘤藥物療法的可行性。
2. 實(shí)驗步驟
2.1選擇腫瘤細(xì)胞系和小鼠品系
在腫瘤細(xì)胞系和小鼠品系的選擇上，需要考慮以下幾個方面：
a. 不同腫瘤細(xì)胞系的成瘤率不同，需選取成瘤率高的細(xì)胞系；
b. 根據(jù)實(shí)驗?zāi)康倪x擇人源或鼠源細(xì)胞系，一般鼠源細(xì)胞系更易成瘤，人源細(xì)胞系更貼近人類腫瘤生長情況；
c. 小鼠品系的選擇要依據(jù)細(xì)胞系來源：人源細(xì)胞系為異種移植，應(yīng)選擇免疫缺陷的小鼠，如nude、NOD/scid，NSG等；鼠源細(xì)胞系為同種移植，應(yīng)選擇與腫瘤細(xì)胞系來源一致的小鼠。
2.2腫瘤細(xì)胞的傳代擴(kuò)增培養(yǎng)
取凍存于液氮的腫瘤細(xì)胞復(fù)蘇并擴(kuò)增，培養(yǎng)，確保腫瘤細(xì)胞的活力和良好的生長狀態(tài)。
2.3計算細(xì)胞接種量
根據(jù)經(jīng)驗，一般鼠源腫瘤細(xì)胞接種2～100萬個/只，而人源腫瘤細(xì)胞則需要200-1000萬個/只以上，具體可參考相關(guān)文獻(xiàn)。根據(jù)所需要實(shí)驗的小鼠總只數(shù)提前計算確定細(xì)胞數(shù)量。
2.4準(zhǔn)備小鼠
一般選擇5-6W小鼠，小于4W動物可能不耐受而過早死亡，大于6W免疫力會增強(qiáng)，不易成瘤；每批實(shí)驗只用同一性別動物，通常雌雄均可，但是根據(jù)研究的腫瘤類型及腫瘤細(xì)胞系選擇（乳腺癌等要選擇雌性，前列腺癌等要選擇雄性）
2.5皮下荷瘤模型的建立
收集體外培養(yǎng)的指數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞，顯微鏡下常規(guī)細(xì)胞計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度，無菌條件下接種于健康動物皮下。接種部位一般選擇血管豐富且易操作的部位，如腋下、腹股溝、側(cè)腹部及頸背部等部位。
2.6實(shí)驗分組和給藥
一般接種7-10天，到瘤體長至1cm左右，可根據(jù)實(shí)驗?zāi)康倪M(jìn)行分組和給藥。一般皮下荷瘤主要用于抗腫瘤藥物的檢測，因此分組常為對照組，陽性藥物組，低、中、高劑量藥物組。
2.7觀測小鼠體重和瘤體體積變化
將小鼠放回原飼養(yǎng)籠，繼續(xù)飼養(yǎng)。定期觀察小鼠狀態(tài)及腫瘤生長情況，以游標(biāo)卡尺按照1-2次/周進(jìn)行腫瘤大小的測量，記錄腫瘤體積及小鼠體重變化曲線。
3. 結(jié)果示例
將結(jié)腸癌細(xì)胞（HCT116）感染慢病毒shSeptin4后，接種于裸鼠腋下，每3天測量瘤體體積，4周后解剖分離瘤體并稱重分析。
4. 參考文獻(xiàn)
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