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Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質(zhì)成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無(wú)聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養(yǎng)基中重建形成膜結(jié)構(gòu)，這種膜結(jié)構(gòu)與天然基質(zhì)膜結(jié)構(gòu)極為相似。濾膜孔徑一般為8μm，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細(xì)胞不能自由穿過，必須分泌水解酶，并通過變形運(yùn)動(dòng)才能穿過這種鋪有Martrigel的濾膜，這與體內(nèi)情況較為相似?？赏ㄟ^這種模型來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的侵襲情況。通過體外模型來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的侵襲情況，主要應(yīng)用于各種細(xì)胞因子對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響及一些抑制血管生成的新藥研究。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1. matrigel在4℃過夜融化
2. 稀釋matrigel至終濃度1mg/ml
3. 在chamber上室底部中央垂直加入稀釋后的matrigel。37℃溫育4-5 h
4. 所有細(xì)胞培養(yǎng)試劑和Transwell chamber放在37℃恒溫水浴箱溫育
5. 消化培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的細(xì)胞，用無(wú)血清培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)整濃度為5*105/ml
6. 在下室加入含20%血清的培養(yǎng)基。上室加入細(xì)胞懸液，37 ℃、5％CO2、飽和濕度條件下繼續(xù)培養(yǎng)24 h
7. 取出chamber，吸干上室液體，移到預(yù)先加入甲醇的孔中，室溫固定30min
8. 取出chamber，吸干上室固定液，移到預(yù)先加入結(jié)晶紫染液的孔中，室溫染色15-30min；用PBS沖洗浸泡數(shù)次，取chamber，先用干棉簽將上室內(nèi)液體吸去，再用棉簽輕輕擦Matrigel凝膠和聚碳酯膜上表面的細(xì)胞
9. 揭下膜表面上的細(xì)胞，晾干，封片
10. 顯微鏡下計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果；（若不用保存底膜，可省去步驟9）
結(jié)果案列：
