| EN
細(xì)胞粘附分子(cell adhesion molecules，CAMs) 是一類膜表面糖蛋白，它們以配體－受體特異性結(jié)合的方式介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間的相互接觸和結(jié)合并調(diào)節(jié)細(xì)胞功能，在胚胎發(fā)育和分化、正常組織結(jié)構(gòu)的維持、炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、凝血和血栓形成、創(chuàng)傷修復(fù)、腫瘤浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移等許多生理和病理過(guò)程中發(fā)揮重要的生物學(xué)作用。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 用10ug/ml的Fn預(yù)鋪96孔板，70ul/孔，4℃過(guò)夜后，PBS洗3遍
2. 再用1% BSA于37℃封閉1h，PBS洗3遍
3. 待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，消化細(xì)胞，用無(wú)血清培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，調(diào)整濃度為5*105/ml
4. 分別接種于預(yù)鋪Fn的96孔板中，每孔5000個(gè)細(xì)胞，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。37 ℃孵育1 h后，PBS洗去未黏附的細(xì)胞
5. 5%戊二醛于4 ℃固定0.5 h，PBS 洗3遍；0.1%的結(jié)晶紫染色，室溫靜止0.5 h，PBS洗3 遍
6. 每孔加入100μl 10%的乙酸，5~10 min后用酶標(biāo)儀檢測(cè)595nm的吸光度值，用以表示黏附細(xì)胞的多少
7. 或者按照每孔加入100 ul甲醇，固定15min
8. 每孔加入100 ul吉姆薩染液，染色15min，PBS洗去染液
9. 倒置顯微鏡下隨機(jī)取5個(gè)隨機(jī)視野計(jì)數(shù)粘附細(xì)胞數(shù)量病拍照，統(tǒng)計(jì)結(jié)果
溫馨提醒：
若用酶標(biāo)儀計(jì)數(shù)為步驟1-6；若需要照片用步驟1-4,7-9。