流式細胞檢測技術是利用流式細胞儀,以高能量激光照射高速流動狀態(tài)下被熒光色素染色的單細胞或微粒,測量其產(chǎn)生的散射光和發(fā)射熒光的強度,從而對細胞的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態(tài)等進行定性或定量檢測的一種現(xiàn)代細胞分析技術。
實驗步驟:
1. 用T25培養(yǎng)瓶培養(yǎng)各細胞株,代細胞生長達到80-90%融合后,棄掉舊培養(yǎng)液
2. 用2ml的PBS洗細胞兩次后,加入胰酶消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓即可,加入4ml的完全培養(yǎng)液終止消化
3. 用移液器輕輕吹下細胞,將細胞混合液移入15ml離心管中,1000r/m離心10min,離心結(jié)束后,棄掉培養(yǎng)液上清,用5mlPBS 懸浮細胞沉淀,1000r/m離心10min
4. 棄上清后用500ul PBS懸浮細胞沉淀。之后分別加入抗體,4℃條件下孵育30min用流式細胞儀進行流式分析
結(jié)果案例: