流式細(xì)胞分選技術(shù)是利用流式細(xì)胞分選儀,以高能量激光照射高速流動狀態(tài)下被熒光色素染色的單細(xì)胞或微粒,測量其產(chǎn)生的散射光和發(fā)射熒光的強(qiáng)度,從而對細(xì)胞的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學(xué)性狀及功能狀態(tài)等進(jìn)行定性或定量檢測的一種現(xiàn)代細(xì)胞分析技術(shù),它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強(qiáng)度和波長將發(fā)光顆粒亞群分開并可實(shí)現(xiàn)單克隆分選,對復(fù)雜樣本中的細(xì)胞進(jìn)行鑒定、分類、定量和分離,分選后的細(xì)胞能直接用于培養(yǎng)、移植、核酸提取、單細(xì)胞PCR擴(kuò)增或原位雜交等。
實(shí)驗步驟:
1. 用T25培養(yǎng)瓶培養(yǎng)各細(xì)胞株,代細(xì)胞生長達(dá)到80-90%融合后,棄掉舊培養(yǎng)液
2. 用2ml的PBS洗細(xì)胞兩次后,加入胰酶消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓即可,加入4ml的完全培養(yǎng)液終止消化
3. 用移液器輕輕吹下細(xì)胞,將細(xì)胞混合液移入15ml離心管中,1000r/m離心10min,離心結(jié)束后,棄掉培養(yǎng)液上清,用 5mlPBS 懸浮細(xì)胞沉淀,1000r/m離心10min
4. 棄上清后用500ul PBS懸浮細(xì)胞沉淀。之后分別加入抗體,4℃條件下孵育30min用流式分選細(xì)胞儀進(jìn)行流式分析
結(jié)果案例: