在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),而在細(xì)胞凋亡早期,細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴(lài)性磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。將Annexin V進(jìn)行熒光素(EGFP、FITC)標(biāo)記,以標(biāo)記了的Annexin V作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1. 搜集細(xì)胞
2. 加入5μLAnnexin V-FITC,輕輕混
3. 室溫避光孵育
4. 離心,加Annexin V-FITC重懸細(xì)胞
5. 加染色液,室溫避光保存
6. 流式細(xì)胞儀檢
結(jié)果案列: