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細(xì)胞株的污染鑒定、預(yù)防和處理問(wèn)題介紹
普通微生物污染：培養(yǎng)基渾濁，高倍鏡觀察有微生物污染；按規(guī)定棄用并全面嚴(yán)格滅菌。
支原體污染：顯微鏡無(wú)法觀察，依經(jīng)驗(yàn)表現(xiàn)為細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，有細(xì)胞漂浮等等，應(yīng)通過(guò)PCR 等方法鑒定，如發(fā)現(xiàn)支原體污染，應(yīng)按規(guī)定棄用，實(shí)驗(yàn)室要及時(shí)全面消毒滅菌，防止蔓延。（有些常規(guī)性細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)不受支原體污染影響，可以繼續(xù)使用細(xì)胞傳代，為防污染擴(kuò)大蔓延，可以選擇性的在培養(yǎng)基中加入高效價(jià)的其它種抗生素，并在隔離實(shí)驗(yàn)室操作和獨(dú)立使用一切用具與培養(yǎng)基等）。
支原體污染檢測(cè)：支原體污染在細(xì)胞培養(yǎng)中最常見(jiàn)、不易被查覺(jué)，但支原體污染可顯著影響細(xì)胞功能干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。支原體是介于細(xì)菌和病毒之間的目前所知能獨(dú)立生活的最小微生物，它無(wú)細(xì)胞壁，形態(tài)呈高度多形性，最小直徑0.2um，可通過(guò)濾器。 目前通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)100余株/系細(xì)胞的檢測(cè)，形勢(shì)不容樂(lè)觀。污染率達(dá)30% ~ 60% 。課題組從國(guó)外引進(jìn)細(xì)胞株/系也經(jīng)常出現(xiàn)支原體的污染。支原體在污染細(xì)胞后，它通過(guò)影響細(xì)胞的DNA、RNA 的合成及急速消耗培養(yǎng)基中的氨基酸來(lái)抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)，并能降低細(xì)胞的融合率。因此，在運(yùn)用各種細(xì)胞系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究時(shí)，首先要證明所用細(xì)胞有無(wú)支原體的污染。支原體污染后，培養(yǎng)基不發(fā)生渾濁，細(xì)胞病變輕微或不明顯，因此難以發(fā)現(xiàn)。目前，支原體檢測(cè)的方法有以下幾種：（a）相差顯微鏡觀察；（b）低張?zhí)幚淼匾录t染色法；（c）熒光染色法；（d）酶標(biāo)法；（e）PCR法（優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，檢測(cè)耗時(shí)短，樣品量小，只需50ul細(xì)胞培養(yǎng)用液上清；缺點(diǎn)：引物及制劑費(fèi)用較高）。