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細(xì)胞的低溫守護(hù)者,解讀細(xì)胞凍存液的重要性!

2024-10-30 14:24 來(lái)源:admin 點(diǎn)擊:12

01

細(xì)胞凍存的概念

科學(xué)研究過(guò)程中,冷凍保存是一種常用的極低溫度保存細(xì)胞和組織的技術(shù),溫度降低可有效延緩生命體內(nèi)微觀尺度的新陳代謝、主動(dòng)運(yùn)輸、酶促反應(yīng)等生命活動(dòng)。

將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái),然后在需要的時(shí)候復(fù)蘇起來(lái)用于實(shí)驗(yàn),這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。既可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,又起到了細(xì)胞保種的作用。


02

細(xì)胞凍存的意義

-保護(hù)重要細(xì)胞系,方便后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。
-保存人類(lèi)和動(dòng)物的細(xì)胞,以備移植之用。

-保存細(xì)胞庫(kù),以備臨床和研究之用。


03

細(xì)胞凍存的原理

細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境,減少細(xì)胞代謝,以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù),細(xì)胞在不加任何保護(hù)劑的情況下冷凍,細(xì)胞內(nèi)外的水分會(huì)很快形成冰晶從而引發(fā)一系列的不良反應(yīng):
  • 部分蛋白質(zhì)因局部電解質(zhì)濃度增高和pH值改變而變性,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)部空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。

  • 細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成和細(xì)胞膜系統(tǒng)上蛋白質(zhì),酶的變性等會(huì)限礙細(xì)胞的能量代謝。

  • 胞膜上的類(lèi)脂蛋白復(fù)合體在冷凍中易發(fā)生破壞引起胞膜通透性的改變,使細(xì)胞內(nèi)容物喪失。

  • 隨著冷凍溫度的降低,冰晶體積膨脹造成DNA的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生損傷從而引起細(xì)胞死亡。

在溶液中加入低溫保護(hù)劑(penetrating/permeable,CPA),可以保護(hù)細(xì)胞免受冷凍損傷。

【原理】

  • 常用的低溫保護(hù)劑是DMSO,它是一種滲透性保護(hù)劑,可迅速透入細(xì)胞,降低細(xì)胞的冰點(diǎn),還可以抑制細(xì)胞代謝,減緩細(xì)胞老化。

  • 提高胞膜對(duì)水的通透性,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)水滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷;解凍時(shí),促進(jìn)細(xì)胞外水進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),緩解滲透性腫脹。

  • 稀釋細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中的電解質(zhì),減少溶質(zhì)損傷。


04

細(xì)胞凍存常見(jiàn)的方法

1972年, Mazur博士提出了細(xì)胞低溫?fù)p傷的“兩因素假說(shuō)”,后形成了細(xì)胞低溫保存的理論體系, 且其成為近半個(gè)世紀(jì)以來(lái)指導(dǎo)和優(yōu)化低溫保存的黃金法則。當(dāng)降溫速率不高也不低, 細(xì)胞適度脫水、細(xì)胞內(nèi)形成少量冰晶或者沒(méi)有冰晶形成,“溶液損傷”和“胞內(nèi)冰損傷”的累積效應(yīng)最小時(shí), 細(xì)胞的存活率最高, 該降溫速率被稱為最優(yōu)降溫速率。
在過(guò)去的幾十年中,科研工作者將培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例配制成凍存液:

配合手工使細(xì)胞從4℃、-20℃、-80℃到液氮中逐步轉(zhuǎn)移使其達(dá)到“慢凍”的效果。

  • 使用程序性降溫盒直接將凍存細(xì)胞懸液放入-80℃,而后轉(zhuǎn)移到液氮中長(zhǎng)期保存。
  • 使用程序性降溫儀,利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮罐中長(zhǎng)期儲(chǔ)存。


05

傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液主要成分

二甲基亞砜(DMSO)DMSO是一種有機(jī)溶劑,可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外的滲透壓來(lái)降低細(xì)胞凍結(jié)時(shí)的冰晶形成,減少細(xì)胞器官和膜的破壞。DMSO還可以抑制細(xì)胞代謝,減緩細(xì)胞老化。
  • 胎牛血清(FBS):FBS含有豐富的蛋白質(zhì)和生長(zhǎng)因子,可以為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和保護(hù),還可以吸附細(xì)胞表面的冰晶,防止細(xì)胞被冰晶損傷。

  • 肝素:肝素是一種抗凝劑,可以防止細(xì)胞在凍存過(guò)程中發(fā)生凝集,還可以抑制細(xì)胞表面的凝血酶,防止細(xì)胞發(fā)生血栓。

  • 葡萄糖:葡萄糖可以為細(xì)胞提供能量,并幫助細(xì)胞在復(fù)蘇后恢復(fù)活力,還可以抑制細(xì)胞凋亡,保護(hù)細(xì)胞免受損傷。


06

無(wú)血清凍存液的優(yōu)勢(shì)

無(wú)血清凍存液不含動(dòng)物血清成分,其不含血清能夠減少潛在的污染和變異,并提供更穩(wěn)定的凍存條件,有助于保持樣品的可靠性和穩(wěn)定性。即用型產(chǎn)品,無(wú)需程序降溫,操作簡(jiǎn)單,可直接放入超低溫冰箱保存。

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吉諾生物無(wú)血清凍存液


【產(chǎn)品概述】

吉諾生物無(wú)血清細(xì)胞凍存液,為一款通用型細(xì)胞凍存液,無(wú)血清,無(wú)異源體,無(wú)酚紅,成分安全穩(wěn)定,使用滲透型凍存保護(hù)劑與非滲透性凍存保護(hù)劑搭配設(shè)計(jì),雙重保護(hù),細(xì)胞復(fù)蘇率高,支持常見(jiàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞、成體干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞、原代細(xì)胞、免疫細(xì)胞、工程細(xì)胞、癌細(xì)胞等細(xì)胞的凍存。


【產(chǎn)品特性】

· 安全:無(wú)血清,無(wú)異源體成分,化學(xué)成分明確
· 高效:普遍適用于多種細(xì)胞,對(duì)NK等難凍細(xì)胞有較好凍存效果
· 穩(wěn)定:成分簡(jiǎn)單明確,產(chǎn)品成分穩(wěn)定,細(xì)胞凍存穩(wěn)定
· 便捷:即用型,支持細(xì)胞短期(6個(gè)月)儲(chǔ)于-80℃,支持非程序化凍存


【常規(guī)理化指標(biāo)】

· pH中性:6.9~7.4
· 滲透壓(1:9):160~190 mOms/kg
· 內(nèi)毒素:<0.5 EU/ml
· 支原體:無(wú)
· 真菌、細(xì)菌:無(wú)


【產(chǎn)品信息】

貨號(hào)
規(guī)格
保存條件
GNMA1042
100ml
2~8℃,18個(gè)月




【限量試用,立即申領(lǐng)】

試用裝規(guī)格:15ml

試用裝申領(lǐng)方式:

(1)咨詢業(yè)務(wù)員或當(dāng)?shù)亟?jīng)銷(xiāo)商;

(2)關(guān)注公眾號(hào)“吉諾生物”,回復(fù)”試用裝”,輕松參與問(wèn)卷,優(yōu)質(zhì)無(wú)血清細(xì)胞凍存液即刻擁有!