Dulbecco's 改良培養(yǎng)基DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的,與MEM培養(yǎng)基相比,氨基酸的含量增加了2倍,維生素的含量增加了4倍,同時還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及丙酮酸鈉。DMEM培養(yǎng)基最初設(shè)計葡萄糖含量為1000mg/L(低糖型),后來又發(fā)展出葡萄糖含量為4500mg/L(高糖型),現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于各種細胞的培養(yǎng)。
胰蛋白酶(Trypin)是一種絲氨酸水解酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,水解細胞間的蛋白質(zhì),破壞細胞間的連接,從而使組織或貼壁細胞離散成單個細胞。胰酶分散細胞的活性與組織或細胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關(guān),在PH 8.0和37℃時,胰酶的作用能力最強,因此使用胰酶時,應(yīng)把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。
一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,而半貼壁細胞或?qū)σ让该舾械募毎2捎玫蜐舛龋?.05%)的胰酶進行細胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,從而破壞細胞連接促進細胞的解離,因此在胰酶溶液中常常會加入一定量的EDTA混合使用,以增強解離效果。
注意事項
1、由于不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣,因此操作人員應(yīng)根據(jù)實際情況,確定最佳消化時間;消化細胞時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁和生長狀況;
2、使用本產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作,避免污染;
3、不宜長時間放置于室溫環(huán)境或4℃長期保存;
4、2℃~8℃中解凍,搖勻后使用,切忌反復(fù)凍融,用量較少時建議分裝凍存。
5、本產(chǎn)品僅用于科研或進一步研究使用,不用于診斷和治療。