Dulbecco's 改良培養(yǎng)基DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的,與MEM培養(yǎng)基相比,氨基酸的含量增加了2倍,維生素的含量增加了4倍,同時還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及丙酮酸鈉。DMEM培養(yǎng)基最初設(shè)計葡萄糖含量為1000mg/L(低糖型),后來又發(fā)展出葡萄糖含量為4500mg/L(高糖型),現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞的培養(yǎng)。
胰蛋白酶(Trypin)是一種絲氨酸水解酶,它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì),破壞細(xì)胞間的連接,從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個細(xì)胞。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時間有關(guān),在PH 8.0和37℃時,胰酶的作用能力最強,因此使用胰酶時,應(yīng)把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細(xì)胞損傷。
一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度(0.05%)的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離,因此在胰酶溶液中常常會加入一定量的EDTA混合使用,以增強解離效果。
注意事項
1、由于不同的組織或者細(xì)胞對胰酶的作用反應(yīng)不一樣,因此操作人員應(yīng)根據(jù)實際情況,確定最佳消化時間;消化細(xì)胞時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁和生長狀況;
2、使用本產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作,避免污染;
3、不宜長時間放置于室溫環(huán)境或4℃長期保存;
4、2℃~8℃中解凍,搖勻后使用,切忌反復(fù)凍融,用量較少時建議分裝凍存。
5、由于D-Hank's平衡鹽溶液NaHCO3含量較低(0.35g/L),因此該型胰蛋白酶溶液不能用于5% CO2的環(huán)境,若放入CO2培養(yǎng)相,溶液將迅速變酸,使用時應(yīng)注意;
6、本產(chǎn)品中含有酚紅且采用干冰運輸,因此在運輸過程中包裝內(nèi)會有部分二氧化碳累積,這些二氧化碳可能會進(jìn)入到溶液中導(dǎo)致PH略微下降,從而導(dǎo)致溶液顏色由粉紅色變成橙色。該種橙色的溶液依然可以使用或者也可以采用無菌的2M氫氧化鈉溶液對PH進(jìn)行微調(diào)后使用;
7、本產(chǎn)品僅用于科研或進(jìn)一步研究使用,不用于診斷和治療。